נושא הפרוייקט
מספר פרוייקט
מחלקה
שמות סטודנטים
אימייל
שמות מנחים
בידוד ואפיון נוירונים מוטורים מעכברים מטופלי Fc
Isolation and characterization of motor neurons from Fc-treated mice
תקציר בעיברית
נוירונים מוטוריים הם תאי עצב, המהווים חלק ממערכת העצבים המרכזית ושולטים בין השאר בעיצבוב שרירי הגוף. מחלת טרשת צדדית אמיוטרופית, מחלת ניוון שרירים סופנית, מאופיינת במוות של תאי עצב מוטוריים. מחקר קודם שבוצע במעבדה שלנו, הראה שטיפול עכברי mSOD1 ב-Fc מהנוגדן ריטוקסימאב מעכב את התקדמות המחלה ומוריד הסתננות ומיון תאי חיסון של מערכת המשלים, בעיקר תאי B פלסמטיים, המייצרים נוגדנים. היפותיזת מחקר זה גורסת שטיפול ב Fc שומר על מספר גבוה של תאי עצב מוטוריים חיים לאורך המחלה. לכן, בעבודה זו הערכתי באופן מולקולרי את כמות התאים החיים באמצעות שיטות אימונוהיסטוכימיה וניתוח ביטוי גנים. לשם כך, נאספו דגימות של חוטי שדרה (SC) מעכברי mSOD1מטופלים ועכברים שאינם מטופלים ומהם בודדו תאים ונלקחו דגימות של חוטי שדרה להקפאה, לחיתוך ולהסתכלות במיקרוסקופיה קונפוקלית. החתכים נצבעו לתאי עצב, לתאי עצב מוטוריים ולתאי גליה באמצעות מרקרים פלורסנטיים. מהתאים הופקו רצפים של mRNA אשר הומרו לרצפי-cDNA, ובוצע ניתוח של ביטוי גנים באמצעות RT-PCR. בשל כשלים טכניים, התוצאות שהתקבלו לא היו ברורות ונדרש לחזור על הניסויים.
תקציר באנגלית
Motor neurons are nerve cells located in the central nervous system that control various downstream targets, including muscles. Amyotrophic lateral sclerosis (ALS), a terminal muscular dystrophy, is characterized by the death of motor neurons. A previous study performed in our laboratory showed that treatment of mSOD1 mice with Fc from the antibodies Rituximab inhibits disease progression and decreases the infiltration and differentiation of immune cells of the complement system, mainly plasma B-cells, which produce antibodies. The hypothesis of this study claims that treatment with Fc keeps a high number of motor neurons alive throughout the disease. Therefore, in this project I molecularly evaluated the amount of living cells using immunohistochemistry and gene expression analysis. Spinal cord (SC) samples were collected from mSOD1-treated and untreated mice, the cells were isolated from the SC samples, then were frozen and finally sectioned in order to detect cells in confocal microscopy. The sections were stained for neurons, motor neurons and glial cells using specific fluorescence markers. The mRNA sequences was extracted from the isolated cells, converted into cDNA sequences, and then an analysis of gene expression was performed using RT-PCR. Due to technical failures, the results obtained were not clear and thus it is necessary to repeat the experiments